Estabilidade dos anticorpos anti-HIV em amostras de soro armazenadas por períodos de dois a dezoito anos / Stability of anti-HIV antibodies in serum samples stored for two to eighteen years periods

Introduction: The antibodies have an important role in the serodiagnosis, constituting the most widely used biomarkers to detect and confirm various diseases. Objective: To investigate the reproducibility of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity, to assess the stability of the sera samples stored at -20ºC for two to eighteen years. Method: Sera were collected in the period 1988-2004 for routine anti-HIV antibodies diagnostic testing. The remaining samples stored at -20ºC, were analyzed in this study. Serum sample stability was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), indirect immunofluorescence assay (IFA), and Western blot (WB) for detecting anti-HIV antibodies. The previously found results (1988-2004) and those obtained in 2006 were subjected to Kappa index analysis. Result: In the period 1988-to 2004, the degree of concordance of the ELISA/EIA, IFA and WB results were considered, good (k = 0.80), regular (k = 0.35), and good (k = 0.63), respectively. Conclusion: Regarding HIV serologic test, the serum samples were stable for 18 years in ELISA/EIA and for 4 years in IFA technique, however, for the WB methodology it was not possible to determine the time of stability of the anti-HIV antibodies...

Introdução: Os anticorpos possuem papel fundamental no sorodiagnóstico e constituem os mais difundidos biomarcadores empregados na detecção e na confirmação de diversas doenças. Objetivo: Verificar a reprodutibilidade dos resultados de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV) para avaliar a estabilidade dos soros armazenados a -20ºC durante período de dois a dezoito anos. Método: Os soros utilizados foram provenientes de amostras remanescentes da rotina diagnóstica para detecção de anticorpos anti-HIV, no período de 1988 a 2004, os quais estavam armazenados em freezer a -20ºC. A estabilidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), imunofluorescência indireta (IFI) e Western blot (WB) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados dos testes realizados anteriormente (1988-2004) e os obtidos em 2006 foram submetidos à análise do índice Kappa. Resultado: No período de 1988-2004, os graus de concordância dos resultados do ELISA/EIA, IFI e WB foram considerados, respectivamente, bom (k = 0,80), regular (k = 0,35) e bom (k = 0,63). Conclusão: No que diz respeito à sorologia para HIV, as amostras de soro foram estáveis por 18 anos no ELISA/EIA e por quatro anos na técnica de IFI, no entanto, para a metodologia de WB, não foi possível determinar o tempo de estabilidade dos anticorpos anti-HIV...

Estudo de homogeneidade dos soros utilizados em controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids / AidsHomogeneity study of the internal quality control sera for immunodiagnosis of HIV/AIDS

Introduction: The present study reports the data from the first homogeneity assessment of samples composing the serum panels produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, São Paulo. These samples have been distributed to the public laboratories and those partaking in the Brazilian Unified Health System, and to the participants in the Internal Quality Control Program for human immunodeficiency virus (HIV) antibody (Ab) testing. Objective: To assess the homogeneity of serum samples in panels from different lots for HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnosis by using the statistical method to ensure quality of the reference material. Method: Sera homogeneity was evaluated by means of enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) for detection of HIV Ab, and the one-way analysis of variance was employed for analyzing the data. No statistically significant differences were found among the several serum vials. Conclusion: The sera dispensed in the vials were homogeneous in the respective lots...

Introdução: No presente estudo estão descritos os resultados das primeiras análises feitas sobre a avaliação da homogeneidade das amostras componentes de painéis de soros produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz e distribuídos aos laboratórios públicos e conveniados ao Sistema Único de Saúde e participantes do Programa de Controle de Qualidade Interno para imunodiagnóstico de vírus da imunodeficiência humana/síndrome da imunodeficiência adquirida (HIV/AIDS). Objetivo: Avaliar a homogeneidade das amostras de soro componentes de painéis de diferentes lotes para imunodiagnóstico de HIV/Aids por meio de método estatístico para garantir a qualidade do material de referência. Material e método: A homogeneidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados foram submetidos à análise de variância fator único. Não foram encontradas diferenças significativas entre os resultados obtidos para os diversos frascos de soro. Conclusão: As amostras distribuídas nos frascos foram homogêneas entre si nos respectivos lotes...

Estabilidade dos soros para o controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/AIDS / Study on the stability of internal quality control sera for HIV/AIDS immunodiagnostic tests

Introduction: The use of reference materials in order to assure and perform the quality control of analytical measurements is a requirement in clinical laboratories. Objectives: Stability of serum samples, kept frozen at -20°C for long-term storage and at varied temperatures during short periods, was evaluated by investigating the persistency of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity on enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot and indirect immunofluorescence assays. Method: The analyzed sera were part of serum panels (comprised of anti-HIV positive and negative samples), produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, which have been the reference specimens for producing the internal quality assurance sera of HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnostic assays. Sera stability was assessed in samples stored at -20°C for 56 weeks, and at various temperature conditions: from 2°C to 8°C (refrigerator), from 15°C to 25°C (room temperature), at 37°C (incubator) and at -80°C (freezer) for 24 and 48 hours. The statistical analyses on HIV-negative serum samples (long-term storage) were significant (p < 0.05), and neither adverse effects on these samples as the occurrence of false-positive results nor false-negative results in HIV antibody positive sera were found in both studies. Conclusion: It was possible to conclude that the reference material remained stable for 48 hours at different temperatures (short-term) and it remained stable at -20°C for 56 weeks (long-term)...

Introdução: A utilização de materiais de referência para assegurar e desempenhar o papel de controle de qualidade das medições analíticas é requisito em laboratórios clínicos. Objetivo: O presente estudo avaliou a estabilidade das amostras de soro, armazenadas a -20°C por um longo período de tempo e durante curto prazo em diferentes temperaturas, quanto à invariabilidade da reatividade de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV), por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot e imunofluorescência indireta. Método: As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada em amostras armazenadas a -20°C por 56 semanas e nas diferentes condições de temperaturas: de 2°C a 8°C (geladeira), de 15°C a 25°C (ambiente), 37°C (estufa) e -80°C (freezer), durante 24 e 48 horas. Os resultados das análises de tendência das amostras de soro HIV negativo (armazenamento de longo prazo) foram significantes (p < 0,05) e nenhum efeito adverso foi observado nessas amostras, como a ocorrência de resultados falso-positivos, tampouco foram detectados resultados falso-negativos em amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV em ambas as avaliações. Conclusão: Foi possível concluir que o material de referência manteve-se estável por 48 horas nas diferentes temperaturas (curto prazo) e permaneceu estável a -20°C por 56 semanas (longo prazo)...

Avaliação dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade dos soros para a detecção de anticorpos anti-HIV / Assessing the effect of multiple freeze-thaw cycles on the stability of serum samples for anti-HIV antibody detection

No presente estudo foi investigado o impacto dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade das amostras de soro estocadas a -20 °C quanto à reatividade de anticorpos anti-HIV. As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia – Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids. A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada por meio de ELISA/EIA, Western blote imunofluorescência indireta, em amostras submetidas a 11 consecutivos ciclos de congelamento e descongelamento, que variaram de 7 a 60 ciclos. Nenhum efeito estatisticamente significante na reatividade dos anticorpos específicos foi observado. Portanto, o procedimento de congelamento e descongelamento, em até 60 ciclos, não causou efeitos adversos na reatividade das amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV, sem ocorrência de reações falso-negativas, tampouco de resultados falso-positivos em amostras negativas para HIV.

Implementation of a strategy for improving the serological diagnosis of HIV/AIDS by introducing the internal quality control / Implantação de estratégia para a melhoria do diagnóstico sorológico de infecção por HIV/AIDS pela introdução de controle de qualidade interno

The present study reports the data resulted from the first evaluation on the performance of the laboratory units of the HIV/AIDS Diagnosis Laboratory Network of the State of São Paulo, which have agreed to participate in the Internal Quality Control scheme for HIV antibody testing (HIV-IQC) at the respective routine diagnostic services. From April 2009 to February 2010, the HIV-IQC serum panels were distributed to 37 laboratories of the Sub-Network of São Paulo State. Of these, 27 (73.0%) sent the forms back to the IAL-Central Lab with the achieved results from the IQC in HIV EIA/ELISA kits. Among 22 (59.5%) laboratories, which perform additional HIV antibody testing by indirect immunofluorescence-based assay (HIV-IFA), 11 (50.0%) carried out the HIV-IFA IQC. As identical data were reported from procedures by employing the IQC samples in different batches of EIA/ELISA kits from the same manufacturers, it may inferred that the laboratories have complied with the recommended procedures, and that the standardized conduct has been followed. Furthermore, the analyses on reported results indicated that the majority of commercial diagnostic kits used for routine HIV antibody testing at the Network laboratories show good quality and reproducibility.

No presente estudo estão descritos os resultados das primeiras análises feitas quanto ao desempenho das unidades componentes da Rede de Laboratórios de Diagnóstico de HIV/AIDS do Estado de São Paulo, que concordaram em participar da implantação do controle de qualidade interno para o diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV (CQI-HIV) nos respectivos serviços referentes à detecção de anticorpos anti-HIV. De abril de 2009 a fevereiro de 2010 foram distribuídos os painéis de soro CQI-HIV para 37 laboratóriosda sub-rede do Estado de São Paulo. Desses, 27 (73,0%) enviaram ao IAL Central os formulários com os resultados obtidos no CQI-HIV para EIA/ELISA. Entre os 22 (59,5%) laboratórios que realizam também oensaio de IFI HIV-1 na rotina diagnóstica, 11 (50,0%) executaram o sistema CQI para esse teste. Em vistados laboratórios participantes terem apresentado idênticos dados na determinação de reatividade ideal dasamostras do painel para os conjuntos diagnósticos procedentes de mesmas firmas produtoras e de diferenteslotes, pode-se inferir que os laboratórios seguiram os procedimentos preconizados, o que demonstra aadequada execução da conduta padronizada. Ademais, a análise dos resultados obtidos indica que osconjuntos diagnósticos utilizados pela rede de laboratórios são de boa qualidade e de boa reprodutibilidade.

Molecular characterisation of newly identified HIV-1 infections in Curitiba, Brazil: preponderance of clade C among males with recent infections

As in many areas of Brazil, the AIDS epidemic in Curitiba is relatively stable, but surveillance is important to support public policy. The molecular characteristics of HIV may be instrumental for monitoring epidemic trends. We evaluated plasma HIV-1 RNA (n = 37) from 38 cases presenting with positive serology, who were among 820 consenting volunteers visiting the downtown counselling and serology testing centre. Seroprevalence was 4.6 percent (CI 95 percent 3.2-6.3) and the estimated HIV incidence, as defined by the BED assay, was 2.86 persons/years (CI 95 percent 1.04-4.68). An additional set of contemporaneous, anonymous samples from a local laboratory was also analysed (n = 20). Regions of the HIV-1 polymerase (n = 57) and envelope (n = 34) were evaluated for subtyping, determination of mosaic structure, primary drug resistance mutations (pDRM), envelope V3 loop motifs and amino acid signatures related to viral tropism. HIV-1 clade B was observed in 53 percent of cases; HIV-1C in 30 percent and BC mosaics in 14 percent, with one F genome and one CF mosaic. Clade C infection was associated with recent infections among males (p < 0.03). Stanford surveillance pDRM was observed in 8.8 percent of sequences, with 7 percent showing high level resistance to at least one antiretroviral drug. Tropism for CXCR4 co-receptor was predicted in 18 percent of envelope sequences, which were exclusively among clade B genomes and cases with serological reactivity to chronic infection.

Prevalência de deficiência de vitamina A e fatores associados em pré-escolares de Teresina, Piauí, Brasil / Prevalence and factors associated with vitamin A deficiency in preschool children from Teresina, Piauí, Brazil

A deficiência de vitamina A constitui um problema de saúde pública no Nordeste brasileiro. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da deficiência de vitamina A e os fatores associados em pré-escolares de Teresina, Piauí, Brasil. Os níveis de retinol sérico foram determinados por HPLC, e foram investigadas as características sócio-econômicas e demográficas de 631 crianças com idade de 36 a 83 meses. Investigou-se a associação entre os níveis de retinol e as variáveis de interesse por análise de regressão linear uni e multivariada. O nível médio de retinol foi de 1,21mmol/L (IC95 por cento: 1,17-1,25µmol/L), independente do sexo (p = 0,259). A hipovitaminose A (retinol < 0,69µmol/L) foi observada em 15,4 por cento das crianças (IC95 por cento: 12,7-18,4), com tendência à diminuição com o avanço da idade; 29 por cento das crianças (IC95 por cento: 25,2-32,4) tinham valores aceitáveis de retinol, mas não adequados (0,70 a 1,04µmol/L). Encontrou-se associação positiva entre níveis de retinol e idade, renda per capita, suplementação prévia com vitamina A e escolaridade materna. A prevalência de hipovitaminose A representa um problema moderado de saúde pública, ressaltando a importância das estratégias de combate a essa carência na região.

Estimativa da incidência de infecção pelo HIV com amostras de soro de gestantes e de usuários de CTA encaminhadas para diagnóstico, empregando o algoritmo de testes sorológicos para infecção recente pelo HIV(STARHS)

O algoritmo de testes sorológicos para detecção de soroconversão recente para o HIV (STARHS) (Janssen et al., 1998) foi empregado neste estudo para discriminar infecções recentes e crônicas pelo HIV e estimar a incidência da infecção por HIV com amostras de soro provenientes de gestantes, usuários de Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) e indivíduos com suspeita de infecção recente pelo HIV. A associação entre os padrões de bandas presentes no teste de Western blot para HIV-1(WB) e os resultados do STARHS foi avaliada. Foram analisadas 106 amostras de soro de gestantes, 42 de usuários de CTA, 06 de soroconvertores recentes para o HIV (média de 188 dias) e 37 de indivíduos suspeitos de infecção recente pelo HIV. Estimativas de soroincidência de HIV de 0,2 (IC 95 por centos, 0,041-0,608) e 3,3 (IC 95 por cento, 1,426-6,345) por 100 amostras de soro-ano foram observadas com a análise das amostras de gestantes, de 1999 a 2002, e de usuários de CTA, de 2000 a 2001, respectivamente. Os padrões de intensidade de cor das bandas observadas na análise das amostras de soro deste estudo por meio de WB sugerem que há associação entre ausência ou intensidade baixa da banda gp41 e infecção recente [OR=16,44(IC 95%, 6,32 -42,75; p<0.001] e presença das bandas p55, p24 e p17, em intensidade de forte, e infecção crônica [OR=7,01(IC 95%, 3,05-16,14); p<0,001]... (AU)

The Serological Testing Algorithm for Recent HIV Seroconversion (STARHS) (Jansssen et al., 1998) has been employed in this study to discriminate recent and chronic HIV infections and estimate HIV incidence on HIV-positive sera samples from pregnant women (PW), Voluntary Counseling and Testing (VCT) attendees, and persons suspected to be recently infected by HIV. The association between banding patterns observed on the HIV-1 Western blot test and STARHS results was assessed. A total of 106 samples from PW, 42 samples from VCT attendees, 06 samples from HIV serconverters (mean of 188 days), and 37 samples from subjects under recent HIV-infection suspicion has been analyzed. HIVseroincidence estimates of 0.2 (95% CI, 0.041-0.608) and 3.3 (95% CI, 1.426 ­ 6.345) per 100 sera samples-years were observed for PW, from 1999-2002, and for CTA population, from 2000-2001, respectively. The patterns of color intensity of bands observed in the analysis of sera samples from this study suggest association between absence or weak reactivity at gp41 region and recent infection [OR = 16.44 (95% CI, 6.32 ­ 42.75); p<0.00], and between strong reactivities at p55, p24, and p17 bands and chronic infection [OR = 7.01(95%CI, 3.05 ­ 16.14); p<0.001]. Data from the present study suggest that the evaluation of antiHIV antibodies profiles from specimens stored in sera banks and of raw data from WB performed for HIV/Aids diagnosis could be useful on HIV incidence estimates using serological algorithms, especially when epidemiological and socio-demographic data are available. (AU)

Estimativa da incidência de infecção pelo HIV com amostras de soro de gestantes e de usuários de CTA encaminhadas para diagnóstico, empregando o algoritmo de testes sorológicos para infecção recente pelo HIV(STARHS) / HIV infection incidence estimates on sera samples from pregnant women and VCT attendees obtained for diagnosis purposes, by means of serologic testint algorithm for recent HIV seroconversion (STARHS)

O algoritmo de testes sorológicos para detecção de soroconversão recente para o HIV (STARHS) (Janssen et al., 1998) foi empregado neste estudo para discriminar infecções recentes e crônicas pelo HIV e estimar a incidência da infecção por HIV com amostras de soro provenientes de gestantes, usuários de Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) e indivíduos com suspeita de infecção recente pelo HIV. A associação entre os padrões de bandas presentes no teste de Western blot para HIV-1(WB) e os resultados do STARHS foi avaliada. Foram analisadas 106 amostras de soro de gestantes, 42 de usuários de CTA, 06 de soroconvertores recentes para o HIV (média de 188 dias) e 37 de indivíduos suspeitos de infecção recente pelo HIV. Estimativas de soroincidência de HIV de 0,2 (IC 95 por centos, 0,041-0,608) e 3,3 (IC 95 por cento, 1,426-6,345) por 100 amostras de soro-ano foram observadas com a análise das amostras de gestantes, de 1999 a 2002, e de usuários de CTA, de 2000 a 2001, respectivamente. Os padrões de intensidade de cor das bandas observadas na análise das amostras de soro deste estudo por meio de WB sugerem que há associação entre ausência ou intensidade baixa da banda gp41 e infecção recente [OR=16,44(IC 95%, 6,32 -42,75; p<0.001] e presença das bandas p55, p24 e p17, em intensidade de forte, e infecção crônica [OR=7,01(IC 95%, 3,05-16,14); p<0,001]...

The Serological Testing Algorithm for Recent HIV Seroconversion (STARHS) (Jansssen et al., 1998) has been employed in this study to discriminate recent and chronic HIV infections and estimate HIV incidence on HIV-positive sera samples from pregnant women (PW), Voluntary Counseling and Testing (VCT) attendees, and persons suspected to be recently infected by HIV. The association between banding patterns observed on the HIV-1 Western blot test and STARHS results was assessed. A total of 106 samples from PW, 42 samples from VCT attendees, 06 samples from HIV serconverters (mean of 188 days), and 37 samples from subjects under recent HIV-infection suspicion has been analyzed. HIVseroincidence estimates of 0.2 (95% CI, 0.041-0.608) and 3.3 (95% CI, 1.426 ­ 6.345) per 100 sera samples-years were observed for PW, from 1999-2002, and for CTA population, from 2000-2001, respectively. The patterns of color intensity of bands observed in the analysis of sera samples from this study suggest association between absence or weak reactivity at gp41 region and recent infection [OR = 16.44 (95% CI, 6.32 ­ 42.75); p<0.00], and between strong reactivities at p55, p24, and p17 bands and chronic infection [OR = 7.01(95%CI, 3.05 ­ 16.14); p<0.001]. Data from the present study suggest that the evaluation of antiHIV antibodies profiles from specimens stored in sera banks and of raw data from WB performed for HIV/Aids diagnosis could be useful on HIV incidence estimates using serological algorithms, especially when epidemiological and socio-demographic data are available. (AU)